RIPA裂解液（中）

RIPA 裂解液是一种传统的细胞组织快速裂解液，裂解得到的蛋白样品可用于常规的 Western、IP 等。蛋白样品可用 BCA 蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去污剂，不能用 Bradford 法测定 RIPA 裂解后的蛋白浓度。RIPA 裂解液有多种，根据其裂解液的强度大致可以分为强、中、弱三类。选择合适的 RIPA 裂解液或其它裂解液。

本产品已添加 sodium orthovanadate、sodium fluoride、EDTA 和 leupeptin 等多种抑制剂，可有效抑制蛋白降解。如需添加 PMSF，请在临用前加入。

使用方法

对于培养细胞样品：

1. 融解RIPA 裂解液，混匀。取适量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF 的最终浓度为1 mM。

2. 对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150 - 250 μl裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1 - 2秒后，细胞就会被裂解。

3.对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指将细胞弹散。按照6孔板每孔细胞加入150 - 250 μl裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，须分装成50 - 100万细胞/管，然后再裂解。

裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入150 μl裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200 μl或250 μl。

对于组织样品：

1. 把组织剪切成细小的碎片。

2. 融解RIPA 裂解液，混匀。取适量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使 PMSF 的最终浓度为 1 mM。

3. 按照每20 mg组织加入150 - 250 μl裂解液的比例加入裂解液。如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。

4. 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。

5. 充分裂解后，10000 - 14000 g离心3 - 5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

6. 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈涡旋震荡使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。

注：RIPA 裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组 DNA 等的复合物。如不检测和基因组DNA 结合特别紧密的蛋白，可直接离心取上清用于后续实验；如需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，可通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。如检测一些常见的转录因子，例如 NFκB、p53 等时，通常不必进行超声处理，就可检测到这些转录因子。

裂解液选择指南

RIPA裂解液（中）.pdf