产品简介

RIPA裂解液是一种传统的细胞组织快速裂解液，裂解得到的蛋白样品可用于常规的Western、IP等。蛋白样品可用BCA蛋白浓度测定总蛋白浓度，由于含有较高浓度的去污剂，不能用Bradford法测定RIPA裂解后的蛋白浓度。RIPA裂解液有多种，根据其裂解液的强度大致可以分为强、中、弱三类。

本产品已添加sodium orthovanadate，sodium fluoride，EDTA，leupeptin等多种抑制剂，可有效抑制蛋白降解。如需添加PMSF，请在临用前加入。

使用方法

对于培养细胞样品：

1.融解RIPA裂解液，混匀。取适量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1 mM。

2.对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250μl裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。

对于悬浮细胞：

离心收集细胞，用手指将细胞弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250μl裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，须分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。

裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入150 μl裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200μl或250μl。

对于组织样品：

1.把组织剪切成细小的碎片。

2.融解RIPA裂解液，混匀。取适量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。

3.按照每20mg组织加入150-250μl裂解液的比例加入裂解液。如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。

4.用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。

5.充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

6.如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈涡旋震荡使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。

注：RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。如不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白，可直接离心取上清用于后续实验；如需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，可通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。如检测一些常见的转录因子，例如NFκB、p53等时，通常不必进行超声处理，就可检测到这些转录因子。