产品简介 

Western 及 IP 细胞裂解液(Cell lysis buffer for Western and IP)，是一种在非变性条件下裂解细胞的裂解液。 本细胞裂解液裂解的细胞，可以用于 PAGE、Western、免疫沉淀(immunol precipitation, IP)和免疫共沉淀(co-IP)。 蛋白样品可用 BCA 蛋白浓度测定试剂盒(目录号 PQ0011 或 PQ0012)测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去 污剂，不能用 Bradford 法测定蛋白浓度。可参考“V.各种裂解液主要特点、差异和选择”选择合适的裂解 液。 本产品已添加 sodium pyrophosphate、β-glycerophosphate、EDTA、Na3VO4和 leupeptin 等多种抑制剂， 可有效抑制蛋白降解。如需添加 PMSF，请在临用前加入。

使用方法
融解 Western及IP 细胞裂解液，混匀。取适量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1 mM

对于贴壁细胞：

去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150 - 250ul裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1 - 2秒后，细胞就会被裂解。  

对于悬浮细胞：

离心收集细胞，用手指将细胞弹散。按照6孔板每孔细胞加入150 - 250 ul裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，须分装成50 - 100万细胞/管，然后再裂解。

对于组织样品：

把组织剪切成细小的碎片。按照每20 mg组织加入150 - 250 μl裂解液的比例加入裂解液。如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。

用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。充分裂解后，10000 - 14000 g离心3 - 5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈涡旋震荡使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。

注：本产品可用于普通的Western、IP 或 co-IP。裂解细胞或组织后，没有非常粘滞的透明状 DNA 团块形成，不必采用超声处理等就可以非常理想地用于后续操作。另外本裂解液裂解的产物也适合用于磷酸化蛋白的Western 检测

注意事项

1.请在使用本产品前仔细阅读说明书。本产品仅用于科研，不可用于诊断。

2.为了您的安全和健康，请穿戴实验防护服、手套、口罩等必要的防护装备。

3.为达到最佳的裂解效果，尽量避免过多的反复冻融。可适当分装后使用。

4.需自备PMSF。

5.裂解样品的所有步骤都需在冰上或2 - 8℃进行