NP-40 裂解液 

I. 产品信息 目 录 号: KWB005 

规 格: 100ml 

保 存: -20℃ 

效 期: 一年 

II.产品简介 

NP-40 裂解液(NP-40 Lysis Buffer)是一种比较温和的细胞组织裂解液。NP-40 裂解液裂解得到的蛋白样 品可以用于常规的 Western、免疫沉淀(immunol precipitation, IP)和免疫共沉淀(co-IP)等。NP-40 裂解液裂解 得到的蛋白样品可用 BCA 蛋白浓度测定试剂盒(目录号WB134)测定蛋白浓度。由于含有较高浓 度的去污剂，不能用 Bradford 法测定蛋白浓度。本产品已添加 sodium pyrophosphate、β-glycerophosphate、sodium orthovanadate、sodium fluoride、EDTA 和 leupeptin 等多种抑制剂，可有效抑制蛋白降解。如需添加 PMSF，请在临用前加入。

 III.使用方法 对于培养细胞样品： 

融解NP-40裂解液，混匀。取适量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1 mM。

 对于贴壁细胞：

去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可 以不洗)。按照6孔板每孔加入150 - 250 μl裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充 分接触。通常裂解液接触细胞1 - 2秒后，细胞就会被裂解。

 对于悬浮细胞：

离心收集细胞，用手指将细胞弹散。按照6孔板每孔细胞加入150 - 250 μl裂解液的比例 加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，须 分装成50 - 100万细胞/管，然后再裂解。 裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入150 μl裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大 裂解液的用量到200 μl或250 μl。

 对于组织样品： 

1. 把组织剪切成细小的碎片。 

2. 融解 NP-40 裂解液，混匀。取适量的裂解液，在使用前数分钟内加入 PMSF，使 PMSF 的最终浓度为 1 mM。 

3. 按照每20 mg组织加入150 - 250 μl裂解液的比例加入裂解液。如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解 液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。 

4. 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。 

5. 充分裂解后，10000 - 14000 g离心3 - 5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免 疫共沉淀等操作。

 6. 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈涡旋震荡使样品裂解充分。 然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用 匀浆器那样裂解得比较充分。