产品简介

 SDS 裂解液(SDS Lysis Buffer)是一种比较强烈的细胞组织裂解液。SDS 裂解液裂解得到的蛋白样品可 以用于常规的 Western、染色质免疫共沉淀(chromatin immunoprecipitation, ChIP)等。SDS 裂解液裂解得到 的蛋白样品可用 BCA 蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度 的去污剂，不能用 Bradford 法测定蛋白浓度。 本产品已添加 sodium pyrophosphate、β-glycerophosphate、sodium orthovanadate、sodium fluoride、EDTA 和 leupeptin 等多种抑制剂，可有效抑制蛋白降解。如需添加 PMSF，请在临用前加入。

使用方法

1.对于培养细胞样品：

融解 SDS 裂解液，混匀。取适量的裂解液，在使用前数分钟内加入 PMSF，使 PMSF 的最终浓度为 1 mM。

 2. 对于贴壁细胞：

去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可 以不洗)。按照6孔板每孔加入150 - 250 μl裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充 分接触。通常裂解液接触细胞1 - 2秒后，细胞就会被裂解。如果用于ChIP，初步裂解后需在冰浴上继续裂解 10分钟。

3.对于悬浮细胞：

        离心收集细胞，用手指将细胞弹散。按照6孔板每孔细胞加入150 - 250 μl裂解液的比例 加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。如果细胞量较多，须分装成50 - 100万细胞/管，然后再裂解。充分 裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果用于ChIP，初步裂解后需在冰浴上继续裂解10分钟。

4.裂解液用量说明

        通常6孔板每孔细胞加入150 μl裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大 裂解液的用量到200 μl或250 μl。如果用于ChIP，建议6孔板每孔细胞至少加入200 μl裂解液。

5. 对于组织样品：

 1. 把组织剪切成细小的碎片。 2. 融解 SDS 裂解液，混匀。取适量的裂解液，在使用前数分钟内加入 PMSF，使 PMSF 的最终浓度为 1 mM。 3. 按照每20 mg组织加入150 - 250 μl裂解液的比例加入裂解液。如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解 液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。 4. 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。如果用于ChIP，初步裂解后需在冰浴上继续裂解10分钟。 5. 充分裂解后，10000 - 14000 g离心3 - 5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和ChIP等操作。 6. 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈涡旋震荡使样品裂解充分。 然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用 匀浆器那样裂解得比较充分。

注意事项

1. 需自备 PMSF。

2. 裂解样品的所有步骤都需在冰上或 4℃进行。

3. 可能需要通过一些预实验来摸索最佳的适合您实验条件的裂解液。

4. 为取得最佳的使用效果，尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。

5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。