在体外从培养基中提取分泌的蛋白质时,蛋白质产生停止,降解增加。细胞粗提取物中含有许多能够降解提取物中蛋白质的内源性酶,如磷酸酶和蛋白酶。提高完整蛋白质产量的最佳方法是加入已知存在的那些酶的抑制剂。
Protease Inhibitor Cocktail用于组织培养基以提高蛋白质的稳定性。该cocktail起到抑制降解非磷酸化或磷酸化蛋白质底物的蛋白酶的作用。这个cocktail用作组织培养基的补充物,以阻止分泌蛋白的降解。
该Protease Inhibitor Cocktail包含单独的组分,包括Aprotinin、Bestatin、E-64、Leupeptin和Pepstatin A,这些物质对半胱氨酸、丝氨酸、天冬氨酸和氨基肽酶具有广谱特异的抑制性。已经用组织培养基对这种蛋白酶抑制剂cocktail进行了优化和测试。该蛋白酶抑制剂cocktail溶剂为DMSO,作为即用型溶液提供。
试验操作
建议适当地稀释cocktail以用于不同的细胞系。稀释测试至少以100倍的稀释倍数开始,因为DMSO浓度高于0.5%可能对细胞有害。由于不同的细胞系敏感性可能有差异,该cocktail可能需要进一步的稀释。这个cocktail的作用在培养基中可维持48小时,48小时后需要更换含有cocktail的新鲜培养基。
应用:WB,Co-IP,pull-down,IF,IHC,kinase assay等。