Western一抗二抗去除液(Stripping buffer),用于Western中转移了蛋白的PVDF膜或者NC膜的重复利用在Western实验中完成了一抗二抗结合并后续化学发光检测后,有时还需要检测tubulin、actin等表达量相对稳定的蛋白作为参照,或检测其它蛋白进行比较。通过使用一抗二抗去除液,充分去除一抗二抗,可以非常方便地重新利用使用过的PVDF膜h或者NC膜检测其它蛋白。和重新跑一个SDS-PAGE胶相比,不仅省时省力,而且可以消除重新上样而带来的误差,使可比性更强。
使用Western一抗二抗去除液多次重复使用同一张膜,会导致蛋白信号的减弱。但是,本Western一抗二抗去除液,经过多个抗体的检测试验,通常可以重复利用膜3-5次。
使用本试剂只需大约20左右分钟即可实现蛋白膜的重复使用,然后可以进行封闭等后续的Western操作。
不同的Western一抗二抗去除液主要在去除结合的一抗二抗的原理方面略有不同。分别依靠去垢剂、酸性、碱性、还原剂、螯合剂、盐浓度以及一些特殊试剂等的不同组合来解除一抗二抗的结合,同时又不会导致转移到膜上的蛋白的损失。
使用说明
1、在完成Western化学发光检测后,蒸馏水中漂洗5分钟。
2、弃蒸馏水,加入适量的Western一抗二抗去除液(温和通用型),至少需把膜完全覆盖在摇床上室温缓慢漂洗 20min左右(漂洗时间应根据不同的目的蛋白来调整:比如内参抗体等表达量较高的蛋白,可以延长漂洗时间至30min)。
3、弃Western 一抗二抗去除液,用蒸馏水或TBST缓冲液洗膜3次,每次5min,室温振摇。
4、进行封闭(blocking)等Western的后续操作。