产品类型

细胞污染防治

目录号

C0626

保存方法

-20℃ 避光

产品规格

500ul，1ml，5ml

运输条件

冰袋

形式

液体

有效期

24个月

产品简介

黑胶虫也称钙化纳米颗粒细菌，一般存在血清里，细胞培养时0.22μm的滤膜过滤并不能有效地清除血清中的黑胶虫。黑胶虫污染是细胞培养过程中常见的污染之一，其有时会在400倍显微镜下呈小黑点在动，小黑点有时呈点状或片状，运动形式为在原地振动，类似布朗运动，常称之为黑胶虫。

黑胶虫的辨别

形态上有些像细菌，直径约在0.5~1微米。

在400X倒置显微镜小，有典型的布朗运动（不规则的原地小距离抖动）。

细胞内也发现过"黑胶虫"的身影。

"黑胶虫"并不会引起培养液混浊。

"黑胶虫"存在的时间稍长，细胞状态明显恶化，并最后死亡

产品优点

只需1-3天就可以显著抑制“黑点生长，一周左右即可清除“黑点”

对细胞生长无明显影响，高效、特异性清除“黑胶虫”

使用方法

从-20℃C冰箱内取出黑胶虫清除剂，将试剂管瞬时离心(3000rpm，3~5s)后放置于EP管架上，用75%的酒精喷洒试剂管的表面，在生物安全柜中进行无菌操作;

对于黑胶虫污染的细胞，在细胞培养基中加入适量黑胶虫清除剂，通常推荐使用的稀释倍数为2000x，如:6ml的细胞培养基加入3 ul的黑胶虫清除剂混匀。连续加药培养1-2周即可有效清除黑胶虫污染。

若黑胶虫污染较严重，可酌情增加药物浓度以提高清除黑胶虫的效率，推荐尝试最小稀释倍数中间稀释倍数、最大稀释倍数三个浓度进行测试。

以细胞系(成纤维样)为例，建议将细胞分为三份分别采用500x、1000x、2000x三个浓度进行黑胶虫清除，若500x对细胞生长无明显影响，建议采用500x清除黑胶虫，若500x对细胞生长有明显影响，则采用1000x清除黑胶虫，连续加药培养1-2周即可有效去除黑胶虫污染。

细胞类型和稀释倍数参考

操作步骤

1. 使用本试剂前请仔细阅读说明书;

2. 本产品经0.1mm 过滤除菌，使用本产品时无需过滤，可直接加入培养基使用;

3. -20℃保存时不冻结，使用时无需解冻，从-20℃取出即可使用;

4. 为了发挥最好的药效，含药培养基建议现配现用，如果加药培养基未用完，于4℃C冰箱中避光保存，2周内用完，使用培养基前需预热至37℃℃;

5. 贴壁细胞换液或传代前，弃去旧的培养基，用含1000x黑胶虫清除剂的PBS轻轻冲洗细胞表面2次。悬浮细胞、贴壁不牢的细胞、半贴半悬细胞换液或传代前，可利用黑胶虫直径远小于细胞直径的特点，采用150g(或900rpm)低速离心5mins，弃去旧的培养基，再用含1000x黑胶虫清除剂的PBS轻轻冲洗细胞2次。

6. 用含药PBS清洗细胞后，加入含有黑胶虫清除试剂的新鲜完全培养基(传代后铺细胞需更换为新的瓶/板)，1天换液1次，i连续加药4~7天，或者2天换液1次，连续加药7~14天，若黑胶虫污染非常严重时，需增加换液频率和延长处理时间;细胞老化或状态异常时会产生黑色的细胞分泌物，此种分泌物会随着细胞培养不断产生，并不是“黑胶虫”无法通过黑胶虫清除剂有效去除，如遇个别细胞对本试剂敏感，细胞生长速度明显受影响时，建议减量使用或进行稀释度测试，

7. 黑胶虫清除剂处理后，会有很好的清除黑胶虫效果，但是如果环境或使用试剂中仍有污染源存在，细胞可能会再次污染，因此需做好适当的预防措施;

8. 加入本产品进行黑胶虫预防和清除时，无需添加双抗(青霉素-链霉素);

9. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作;

10. 本产品仅供研究或进一步生产使用，不得用于诊断或治疗。