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利用流式细胞分选仪,以高能量激光照射高速流动状态下被荧光色素染色的单细胞或微粒,测量其产生的散射光和发射荧光的强度,从而对细胞(或微粒)的物理、生理、生化、免疫、遗传、分子生物学性状及功能状态等进行定性或定量检测的一种现代细胞分析技术,它可根据发射光的荧光强度和波长将发光颗粒亚群分开并可实现免疫细胞亚群分选、肿瘤干细胞分选、造血干细胞分选、GFP阳性细胞分选、侧群SP细胞分选等,得到高活性、高纯度的目标细胞,继续无菌培养,或用于下游PCR、RNA-Seq、FISH等实验。
免疫分型在流式细胞术的应用中最常见,它利用流式细胞术的独特能力同时分析混合细胞群的多个参数。免疫分型最基本的形式就是使荧光偶联抗体与细胞表面对应的抗原特异性结合,之后利用流式细胞仪,根据细胞表面的荧光对细胞做出分析。
推荐标记常见免疫细胞表型特征
研究对象 | 人 | 小鼠 |
白细胞共同抗原 | CD45 | CD45 |
造血干细胞 | Lin(-), CD34, CD38(-), CD117 | Lin(-/low), Sca-1, CD117 |
B细胞 | CD19, CD20 | CD19, B220(CD45R |
T细胞 | CD3 | CD3 |
辅助性T细胞 | CD3, CD4 | CD3, CD4 |
细胞毒性T细胞 | CD3, CD8 | CD3, CD8 |
调节性T细胞 | CD4, CD25, Foxp3, CD127(low/-) | CD4, CD25, Foxp3 |
树突状细胞 | CD1c, CD141, CD209, MCHclassII | CD11c, MCHclassII |
自然杀伤细胞 | CD16, CD56 | NK1.1(限品系)、CD49b(DX5) |
单核细胞 | CD14, CD16 | CD11b, CD115, Ly-6G(Gr-1) |
巨噬细胞 | CD14, CD68 | CD11b, F4/80 |
巨核细胞/血小板 | CD42b, CD62P | CD41, CD62P |
红细胞 | CD235a | TER-119 |
中性粒细胞 | CD11b, CD15, CD16 | CD11b, Ly-6G(Gr-1) |
样品采集和送样要求
细胞样本:需为单细胞悬浮状态,1-3*10的6次方个,细胞状态良好,活率95%以上,无污染。
外周血:24h内采集的EDTA或肝素抗凝全血5ml左右,无对人体有害的病原体污染。
新鲜组织:2h内采集的小鼠、大鼠等脾、骨髓、胸腺、淋巴结等新鲜组织大约50mg。
抗体需要客户提供吗?
本公司备有biolegend和BD的常用流式抗体(收取抗体使用费)。
客户也可自行提供,需要在实验前提供抗体信息。
试验结果交付标准
原始数据,分析图和PDF版实验报告
实验流程
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